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有效期至長期有效 最后更新2020-10-31 11:19

黃熱病毒IgM抗體ELISA試劑盒 96T

儲存和使用期:2-8°C (本司還有登革,瘧疾,錐蟲,恙蟲,黑熱病,西尼羅河,乙腦,基孔肯雅熱,鉤端螺旋體,立氏克體,等科研診斷試劑)

應用:用于定性檢測人血清,血漿,細胞培養(yǎng)上清液或任何生物液體中的YFV-IgM。

介紹

黃熱病,歷史上稱為黃色杰克,黃色瘟疫或青銅約翰,是一種急性病毒性疾病。在大多數(shù)情況下,癥狀包括發(fā)熱,寒戰(zhàn),食欲不振,e心,特別是在背部的肌肉痛,和頭痛。癥狀通常在五天內(nèi)改善。在一些人在一天內(nèi)改善,發(fā)燒回來,腹痛發(fā)生,肝損傷開始導致黃色皮膚。如果發(fā)生這種情況,出血和腎臟問題的風險也增加。

測定原理

96孔板YFV-IgM特異性抗原。將對照或測試樣品加入到合適的孔中并孵育。用洗滌緩沖液洗去游離組分。將HRP綴合的檢測試劑加入到孔中。 TMB底物用于顯現(xiàn)HRP酶反應。 TMB由HRP催化以產(chǎn)生在加入酸性停止溶液后變?yōu)辄S色的藍色產(chǎn)物。黃色的密度與板中捕獲的樣品的YFV-IgM量成比例。外徑在微板讀數(shù)器中在450nm下通過分光亮度計測量吸亮度,然后可以計算YFV-IgM的濃度。

套件組件

  1. 一個96孔板預涂
  2. 陽性對照:0.5ml
  3. 陰性對照:0.5ml
  4. 洗滌緩沖液(30×):20 ml。稀釋:1:30
  5. 樣品稀釋緩沖液:6ml
  6. 6HRP酶聯(lián)試劑(RTU):6ml
  7. 終止液:6ml
  8. TMB底物:6ml
  9. TMB底物B:6ml
  10. 板密封:2
  11. 密封袋:1

需要材料但不提供

1.37℃培養(yǎng)箱

2.酶標儀(波長:450nm)

3.精確的移液器和一次性移液器吸頭

4.自動洗板機

5.ELISA振蕩器

1.5ml管

7.板蓋

8.吸收濾紙

9.100ml和1L體積量筒。

使用程序:

A.制備樣品和試劑

1. 樣品

收集并立即分析測試樣品(2小時內(nèi))后立即分離。或等分并長期儲存在-20°C。避免多個凍融循環(huán)。

?細胞培養(yǎng)上清:以約2000-3000×rpm離心20分鐘,以去除沉淀,立即分析或分裝,并儲存于-20℃。

?血清:在室溫下凝結(jié)血清(約4小時)。以約2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析血清或等分,并儲存在-20°C。

?血漿:用檸檬酸鹽或EDTA作為抗凝劑收集血漿。在收集30分鐘內(nèi)以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析或等分,并存儲在-20°C冷凍。

尿:在無菌容器中收集,以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即分析或等分,并存儲在-20°C冷凍。

組織:組織勻漿的制備將根據(jù)組織類型而變化。收集和沖洗樣品在2-4℃下用PBS(Ph 7.4)。稱重樣品并用PBS(Ph 7.4)勻化,并對細胞懸浮液進行超聲處理。以2000-3000×rpm離心20分鐘。立即測定或等分并儲存在-80℃。

注意:

1.完全凝結(jié)血液樣品,離心,避免溶血和沈淀。

2.NaN3不能用作試驗樣品防腐劑,因為它抑制HRP。

2.洗滌緩沖液

用蒸餾水稀釋濃縮洗滌緩沖液30倍(1/30)(即將20ml濃縮洗滌緩沖液加入580ml蒸餾水中)。

B.測定程序

在使用前將試劑盒組分和樣品平衡至室溫。建議繪制每個測試的標準曲線。

1.在預涂板上分別設置陽性/陰性,測試樣品和對照(零)孔,并記錄它們的位置。

2.將50μl的陰性和陽性對照等分到設定的孔中。

3.向?qū)φ眨悖┛字屑尤?0μl樣品稀釋緩沖液。

4.向測試樣品孔中加入50μl適當稀釋的樣品。在底部加入溶液而不接觸側(cè)壁。搖動平板以混合內(nèi)容物。

5.用蓋子密封板,并在37℃孵育30分鐘。

6.取下蓋子并通過在吸收性濾紙或其他吸收材料上敲擊板來丟棄板內(nèi)容物。

7.棄去溶液,用洗滌緩沖液洗滌板5次。不要讓孔在任何時候完全干燥。

手動清洗:丟棄溶液,不要接觸側(cè)壁。將吸水濾紙或其他吸收材料上拍出液體。將洗滌緩沖液填滿每個孔,并在ELISA振蕩器上輕輕渦流2 分鐘。丟棄內(nèi)容物,并將吸收性濾紙或其他吸收材料上的板敲打。洗板五次。

自動洗滌:棄去所有孔中的溶液,并用洗滌緩沖液洗滌板5次(用緩沖液過量填滿孔)。在zui后的洗滌之后,翻轉(zhuǎn)該板并敲擊吸收性濾紙或其它吸收材料。建議將清洗器設置為1分鐘的浸泡時間。

8.向每個孔中加入50μlHRP結(jié)合物的試劑(對照孔除外)。在每個孔底部加入溶液,不要接觸側(cè)壁。

9.用蓋子密封板,并在37℃孵育30分鐘。

10.取下蓋子,用洗滌緩沖液洗板5次。

11.向每個孔中加入50μlTMB底物A和50μlTMB底物B,蓋上平板并在37℃下孵育15分鐘。避免暴露于光。

12.向每個孔中加入50μl終止液,充分混勻。顏色應立即變?yōu)辄S色。

13.閱讀O.D.在微板讀數(shù)器中在450nm的吸亮度在加入終止溶液的15分鐘內(nèi)。對于計算,(相對O.D.450)=(每個孔的O.D.450) - (零阱的O.D.450)。標準曲線可以作為每種標準溶液(Y)的相對O.D.450與標準溶液(X)的相應濃度作圖。可以從標準曲線插入樣品的人類YFV-IgM濃度。

14.注意:如果稀釋樣品,稀釋倍數(shù)乘以內(nèi)插法得到稀釋前的濃度。

C.結(jié)果確定

1.試驗有效性:陽性對照的平均值≥1.00; 陰性對照的平均值≤0.10。

2.臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=負控制的平均值+0.15

3.陰性結(jié)果:如果OD值<CUT OFF,樣品為人YFV-IgM陰性。

4.陽性結(jié)果:如果OD值≥CUTOFF,樣品為人類YFV-IgM陽性。

D.注意事項

1.在實驗之前,離心每個試劑盒組分數(shù)分鐘,將所有試劑倒入試管底部。

2.在混合或重新組裝部件時避免起泡或氣泡。

3.洗滌緩沖液可結(jié)晶并分離。如果發(fā)生這種情況,請加熱管以溶解。

4.建議每個對照和樣品一式兩份或重復測量三次。

5.不要讓板在任何時候完全干燥!這可以使板上的生物材料失活。

6.不要重復使用移液器吸頭和管,以避免交叉污染。

7.不要使用不同套件中過期的組件或組件。

8.將TMB底物B儲存在黑暗中,并且為了避免板溫育對于溫度差的邊緣效應,建議在使用前在室溫下使TMB底物平衡30分鐘。用滅菌的吸頭抽吸所需的劑量,不要將殘留溶液倒回到小瓶中。

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公司名 廣州健侖生物科技有限公司(旗艦店) 經(jīng)營模式
公司所在地廣東/廣州市
主營行業(yè)制藥原料  , 
主營產(chǎn)品或服務登革熱檢測試劑盒,瘧疾檢測試劑,軍團菌檢測試劑盒,萊姆病檢測試劑盒,恙蟲病檢測試劑盒
公司簡介 廣州健侖生物科技有限公司是集研制開發(fā)、銷售、服務于一體的高新技術企業(yè),公司產(chǎn)品涉及臨床快速診斷試劑、食品安全檢測試劑,違禁品快速檢測,動物疾病防疫檢測試劑,免疫診斷試劑、臨床血液學和體液學檢驗試劑、微生物檢驗試劑、分子生物學檢驗試劑、臨床生化試劑、有機試劑等眾多領域,同時核心代理Panbio、FOCUS、Qiagen查看更多 >
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