人鱷失調(diào)蛋白(ATCAY)ELISA試劑盒

用途
該試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿或其他相關(guān)生物液體中濃度。


Cayman進口elisa檢測試劑盒檢測原理
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗體包被于酶標板上，實驗時樣品或標準品中的抗原會與包被抗體結(jié)合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素。抗體與結(jié)合在包被抗體上的抗原結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍色，加終止液后變成黃色。用酶標儀在450nm波長處測OD值，抗原濃度與OD450值之間呈正比，通過繪制標準曲線計算出樣品中指標的濃度。
Cayman進口elisa檢測試劑盒

樣品活化方法
生物樣品中的通常以無活性的形式存在，在檢測指標活性前必須進行活化處理。
活化方法如下：
血清、血漿：280 μL標準品&樣品稀釋液中加入40 μL樣品，混勻，加入40 μL活化試劑1，室溫孵育10分鐘。再加入40 μL活化試劑2，混勻后立即檢測。
注意：樣品被稀釋了10倍！
細胞培養(yǎng)上清：20 μL標準品&樣品稀釋液中加入100 μL樣品，混勻，加入40 μL活化試劑1，室溫孵育10分鐘。再加入40 μL活化試劑2，混勻后立即檢測。
注意：樣品被稀釋了2倍！
組織勻漿：1960 μL標準品&樣品稀釋液中加入40 μL樣品，混勻后檢測。
注意：樣品被稀釋了50倍！

精密度
板內(nèi)精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在1塊板子上檢測20次。板間精密度:低濃度樣本,中濃度樣本和高濃度樣本分別在3塊板子上檢測20次。

回收率
分別往5個不同樣本中添加已知濃度的目標蛋白，做回收實驗，得出回收率范圍和平均回收率。

線性
分別往5個樣本中添加已知濃度的目標蛋白，做回收實驗，得出回收率范圍及平均回收率。將5個樣本分別稀釋2倍，4倍，8倍，16倍做回收實驗，得出回收率范圍及平均回收率。

試劑盒組成及保存
未拆封的試劑盒可在4℃保存一周；如果一周以后才使用試劑盒，請拆開試劑盒按照下表中的條件分別保存各組分。

說明：所有試劑瓶蓋須旋緊以防止蒸發(fā)和微生物的污染。
試劑體積以實際發(fā)貨版說明書為準。相關(guān)試劑在分裝時會比標簽上標明的體積稍多一些，請在使用時量取而非直接倒出。


操作步驟
1.標準品的加樣：設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；。
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.加酶：每孔加入酶標試劑100μl，空白孔除外。
4.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
5.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
6.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
7.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
8.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
9.測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

試驗所需自備物品
1.酶標儀(450nm波長濾光片)
2.高精度移液器，EP管及一次性吸頭：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL
3. 37℃恒溫箱，雙蒸水或去離子水
4.吸水紙